ИЗУЧЕНИЕ ЛИСТЬЕВ ОБЛЕПИХИ КРУШИНОВИДНОЙ

ИЗУЧЕНИЕ ЛИСТЬЕВ ОБЛЕПИХИ КРУШИНОВИДНОЙ И СОЗДАНИЕ НА ИХ ОСНОВЕ ОТЕЧЕСТВЕННОГО ПРОТИВОВИРУСНОГО СРЕДСТВА «ГИПОРАМИН»

Обзор

С.А. Вичканова ВНИИ лекарственных и ароматических растений, Москва

Использованию облепихи крушиновидной в народной и традиционной медицине посвящено огромное количество исследований, монографий, обзоров, научных статей. Однако большинство исследований касаются в основном плодов облепихи [10, 14]. Облепиха крушиновидная (Hippophae rhamnoides L.) семейства лоховых (Elaegnaceae) содержит богатейшее количество биологически активных компонентов, в том числе витаминов. Плоды облепихи по держанию витаминов превосходят все известные плоды и ягоды растений России. Получаемое ранее из плодов облепихи (в последние годы - из плодов в смеси с листьями) облепиховое масло содержит смесь каротина и каротиноидов, токоферолов, хлорофилловых веществ и глицеридов, олеиновой, липоевой, пальмитиновой и стеариновой кислот. Облепиховое масло и препараты, его содержащие, используют в качестве противовоспалительного и улучшающего регенерацию средства, в основном, наружно при лучевых поражениях кожи и слизизтых оболочек, кольпитах, эрозиях шейки матки, эндоцервицитах и др. Применение облепихового масла внутрь используют в комплексном лечении язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Облепиховое масло включено также в качестве компонента в ряд лечебных препаратов («Олазоль», «Облеколь», «Гипозоль» и др.) [11]. Сок плодов облепихи оказывает в эксперименте антибактериальный, биостимулирующий (на ферменты желудка, рост животных и др.) и антитоксический эффекты [18].

Во ВНИИ лекарственных и ароматических растений внимание исследователей привлеклили листья и побеги облепихи крушиновидной. Исследования проводили с использованием предложенной нами единой системы отбора высших растений в качестве возможных продуцентов антимикробных, в том числе противовирусных веществ, которая включает схему первичного скрининга растений и предусматривает возможность последующего эффективного направления поиска носителя биологической активности в растении независимо от к.ласса соединений с возможностью контролирования химических исследований биологическим методом [2].

На первом этапе исследования листьев облепихи, изученных в виде водно-спиртовых вытяжек, приготовленных по разработанной автором методике первичного скрининга растений, внедренной в НИР института, установили наличие ингибирующих некоторые бактерии и вирусы свойств, что дало основание начать вторую фазу исследований по химическому выделению биологически активных компонентов из листьев данного растения под биологическим контролем противовирусной активности в отношении вируса гриппа. Комплексная работа химиков и медиков позволила выделить из листьев облепихи биологически активную сумму фенольных соединений, обладающих ингибирующим эффектом в отношении широкого спектра вирусов и бактерий: грипп, герпес, ВИЧ-инфекция, грамположительные бактерии и др. [7, 19], названных «Гипорамин». Одновременно в институте начаты НИР по выращиванию облепихи, как сырья для получения «Гипорамина» в промышленных масштабах [9].

«Гипорамин» - оригинальный отечественный препарат, представляющий собой сухой очищенный экстракт, содержащий полифенольный комплекс галлоэллаготанинов, биологически активными компонентами которого являются гидролизуемые танины (гипорамин, гипофенин В, казауринин, казауриктин, стриктинин, изостриктинин), имеющие общие структурные элементы в виде глюкозогаллоильного и гексагидроксифеноильного остатков [17,20]. Сравнительное изучение вируснейтрализующей активности компонентов гипорамина показало зависимость активности соединений от их молекулярной массы: низкомолекулярные танины стриктинин и изостриктинин (М.м. 634) проявляли слабую активность в концентрации 1000 мкг/мл; изомерные танины казуаринин и казуариктин (М.м. 936) в концентрации 1000 мкг/мл ингибировали 1000 ЭИД/100 вируса гриппа А (Бангкок); гипофенин В (М.м. 1104) и препарат гипорамин обладали наибольшей активностью: даже 10 мкг/мл подавляли 1000 ЭИД/100 вируса гриппа [30].

Изучение вируснейтрализующей активности гипорамина, проведенные с использованием гриппа человека - (А/Англия/333/80(НШ1), A/CCCP/90/77(HlNl), А/Бангкок/1/79 (H3N2), А/Филлипины/2/82(НЗШ), A/CnHranyp/57(H3N2), В/Сингапур/79/ и птиц - А/чайка/Астрахань/777/89(Н13К6), в контактных опытах in vitro с последующей индикацией на куриных эмбрионах, показало, что гипорамин подавляет репродукцию как вируса гриппа А, так и вируса гриппа В. Сравнительное изучение противовирусной активности гипорамина и его основных компонентов (гипорамин, казауринин, гипофенин В, казауриктин, стриктинин, изостриктинин) в дозах 1000,100 и 10 мкг/мл показало, что все они оказывали вируснейтрализующее действие на вирус гриппа, при этом гипорамин, представляющий собой трудноразделимую природную смесь этих компонентов, по активности не уступал ни одному из них. Изучение вирусингибирующего действия гипорамина в отношении вируса гриппа штамм А/Англия/333/82(НШ1) на модели куриных эмбрионов в опытах in ovo показало, что гипорамин в дозе 4 мг/эмбрион полностью ингибировал 10,100 и 1000 ЭИД10о вируса; в дозе 2 мг/эмбрион - 10 ЭИД10о вируса, а в дозах 1 и 0,5 мг/эмбрион - частично снижал количество вируса. При сравнительном исследовании гипорамина с оксолином установлено, что гипорамин в дозе 0,5 мг/эмбрион при введении в аллантоисную полость куриных эмбрионов, предварительно инфицированных вирусом гриппа, ингибировал развитие 10 ЭИД10о вируса гриппа, в то время как вирусингибирующий эффект оксолина в той же дозе проявлялся только в отношении 1 ЭИД10о вируса. Эффективность гипорамина на модели экспериментальной гриппозной инфекции белых мышей, вызванной вирусами гриппа (штаммы A/PR/8/34(H0Nl) и В/Сингапур/222/79), изучали при аэрозольном введении препарата, Выявлена тенденция к увеличению выживаемости животных, зараженных 1 ЛД50 при лечебно-профилактических схемах применения гипорамина: в группах мышей, получавших гипорамин, выживаемость мышей составляла от 33% до 70% в зависимости от кратности введения, в контрольной группе -25% [21-25,32]. При изучении в опытах in vitro комбинированного применения гипорамина с арбидолом (синтетический противовирусный препарат с другим механизмом действия) установлено повышение противовирусной активности в 1,5-2 раза, что свидетельствует о перспективности дальнейших исследований в этом направлении [16].

При исследовании ингибирующей активности гипорамина в отношении аденовируса человека типа 2 использовали перевиваемую линию клеток Нер-2 и цитоморфологический метод, основанный на выявлении клеток, содержащих вирусные внутриядерные включения. В случае предварительного инкубирования вируса с препаратом, авторы установили, что гипорамин в концентрации 10 мкг/мл уменьшал количество инфицированных клеток по отношению к контролю на 95% [22,24].

При исследовании с использованием иммуноферментного анализа установлено, что гипорамин ингибировал репродукцию респираторно-синцитиального вируса в культуре клеток. Его ингибирующий эффект возрастал с увеличением концентрации (при 1 мкг/мл -21,8%, при 10 мкг/мл - 73%). При этом показано, что ингибирующие концентрации гипорамина и виразола практически одинаковы (7 мкг/мл и 5 мкг/мл, соответственно). Ингибирующий эффект гипорамина на репродукцию респираторно-синцитиального вируса, как и на репродукцию вируса гриппа А/Япония/305/57, появляется лишь на ранних стадиях [28, 31].

При изучение вирусингибирующего действия гипорамина в отношении вируса простого герпеса 1типа штамм «Л2» в опытах in vitro и in vivo установлено, что гипорамин в концентрациях 5, 2, 1 и 0.5 мкг/мл полностью ингибировал репродукцию 100, 10 и 1 ТЦД10о вируса герпеса (ХТИЛ=60). В сравнительных опытах показано, что противогерпетическое действие .гипорамина превышало активность как отечественного противовирусного препарата, оксолина, так и зарубежного - «Зовиракс»: в минимальных концентрациях 1 и 0,5 мкг/мл гипорамин полностью подавлял 1, 10 и 100 ТЦДюо данного штамма вируса. Зовиракс в этих же центрациях ингибировал репродукцию лишь 1 и 10 ТЦДюо вируса герпеса, оксолин н : 10 и 50 мкг/мл - лишь 50%, ВПГ-1 [19, 21-25].

При изучении эффективности в отношении вируса СПИД было установлено, что гипорамин в концентрации 30 мкг/мл ингибировал вирусную продукцию в системе клеток Н9 на 50%(ЕД5о), в концентрации 10 и 5 мкг/мл - на 40% , отмечен ингибирующий эффект и в дозе 1 мкг/мл. Сравнительное изучение гипорамина с препаратами «Инозиплекс и «Тимозин», применяющимися за рубежом для лечения СПИД, показало значительное его преимущество: во всех изученных дозах (30 мкг/мл, 10 мкг/мл и 1 мкг/мл) гипорамин оказывает статистически достоверный противовирусный эффект, тогда как только у «Инозиплекса в одной дозе (10 мкг/мл) установлено незначительное действие. Гипорамин может представить интерес для изучения в качестве лечебно-профилактического средства как при ранних стадиях развития СПИД, так и в очагах возможного инфицирования [7, 22, 24].

При исследовании интерферониндуцирующей активности показано, что гипорамн в дозах 10, 20 и 50 мкг/мл способствовал синтезу высоких титров интерферона (максимальные титры интерферона в надосадочной жидкости составили 65-80 МЕ/мл). Повышение концентрации гипорамина до 100 мкг/мл приводило к снижению продукции интерферона до 30 МЕ/мл. При сравнительном изучении гипорамина со стандартными индукторами интерферона ВБН и СЭА установлено, что гипорамин способствовал более высокой продукции интерферона по сравнению с СЭА (32 МЕ/мл) и уступал ВБН (256 МЕ/мл и выше) [22].

При изучении влияния гипорамина на репродукцию ПМВ птиц 1 и 2 серотипа (ПМВ -1-вирус болезни Ньюкасла («Бор») и ПМВ-2 курица /Алма-Ата/71/84, индюк /Юкейпа/56 как в культуре клеток «Vero», так и в курином эмбрионе показано, что гипорамин оказывал вирусингибирующее и вируснейтрализующее действие: в концентрациях 5 и 10 мкг/мл инфекционный титр вирусов снижался на 4,5-4,75 lg ИД50, при 2,5 мкг/мл - на 3,75 lg ИД50 [22].

При изучении влияния гипорамина на активность вирусной нейраминидазы показано, что гипорамин оказывает выраженный ингибирующий эффект (66% в концентрации 100 мкг/мл) Установленный факт существенно отличает гипорамин от известных противогриппозных препаратов амантадина и ремантадина, не ингибирующих активность этого фермента. На основании проведенных исследований авторы делают предположение, что подавление гипораном вирусной нейраминидазы является одним из возможных механизмов его противовирусного действия [26, 27].

При изучении антимикробного спектра гипорамина показано его ингибирующее влияние в концентрации 31,2-62,5 мкг/мл на рост и развитие ряда патогенных микроорганизмов poflaSTAPHYLOCOCCUS, STREPTOCOCCUS и др. [19, 23-25].

При клиническом изучении гипорамина, проведенном по решению Фармакологического государственного комитета МЗ РФ, выявлена его хорошая переносимость и эффективность. Так, первые исследования на добровольцах показали, что препарат не оказывал токсического и побочного действия, не вызывал аллергических реакций [1]. У взрослых гипорамин применяли 374 стационарным больным, в 5 клиниках (НИИ вирусологии, НИИ трансплантологии и искусственных органов, НИИ иммунологии, кафедра кожных и венерических заболеваний и отдел по изучению репаративных процессов ММА им. И.М. Сеченова) с использованием 5 лекарственных форм (таблетки сублингвальные 0,02 г; мазь 0,5%; суппозитории ректальные и вагинальные 0,05 г; лиофилизированный гипорамин 0,02 г для приготовления 0,1-0,2% водных растворов ex tempore). Исследование показало, что при гриппе А и В и других ОРВИ, включая аденовирусную инфекцию, применение гипорамина в ранние сроки (1-2 день) достоверно сокращало продолжительность лихорадки и симптомов токсикоза. Так, при клиническом исследовании гипорамина у 84 больных (Институт вирусологии) с неосложненным гриппом, вызванном вирусом A (H3N2) положительный статистически достоверный лечебный эффект проявлялся по ряду показателей: снижение температуры до нормальной через 24-36 часов от начала терапии у 45,1% больных, исчезновение симптомов токсикоза у 100%, сокращение длительности кашля (особенно при ингалляционном введении 0,2% раствора гипорамина), отсутствие осложнений. При иммунофлуоресцентных исследованиях авторамми установлено сокращение в 1,5 раза сроков обнаружения гриппозного антигена в мазках со слизистой оболочки носа по сравнению  с  контрольной  группой,  где  применяли традиционные  способы лечения.

Гипорамин способствовал повышению у больных уровня сывороточного интерна [12, 13]. Одной из особенностей гипорамина является его эффективность при ангинах, в т.ч. протекающих на фоне ОРВЗ: гипорамин способствовал более ранней нормализации температуры, исчезновению симптомов интоксикации и воспалительных изменений в миндалинах [3,4,6].

При инфекциях, вызываемых Herpes simplex (острый и рецидивирующий герпес экстрагенитальной и генитальной локализации), Varicella zoster (опоясывающий лишай) и цитомегаловирусной инфекции применение гипорамина способствовало более быстрому засыханию ВЕЗИКУЛ и образованию корочек, уменьшению воспалительной реакции, снижению субъективных ощущений, болезненности, зуда. У больных в условиях иммунодепрессивной терапии гипорамин предупреждал развитие вирусных осложнений. Всеми клиниками отмечена высокая эффективность и хорошая переносимость гипорамина, отсутствие побочных явлений и противоказаний при его применении, наличие большого ассортимента лекарственных форм. Проведенные исследования послужили основанием для разрешения гипорамина к применению в медицинской практике в качестве противовирусного средства [3,4, б, 8].

Клинические исследования гипорамина в педиатрии проводили с использованием 4 лекарственных форм: таблетки сублингвальные 0,02 г, лиофилизированный гипорамин 0,02 г (для приготовления 0,1% стерильного раствора ex tempore), мазь 0,5% и суппозитории для детей 0,03 г (лекарственная форма общерезорбтивного действия) в 5 лечебных учреждениях (Институт вирусологии РАМН им. Д.И. Ивановского, ЦНИКВИ МЗ РФ, кафедра кожных и венерических болезней РГМУ, кафедра детских инфекционных болезней РГМУ, кафедра детских РМАПО МЗ РФ). Эффективность и переносимость гипорамина изучали у 251 больного в возрасте от 2 месяцев до 14 лет, среди которых было 120 больных с ОРВИ, 37 - с ветряной оспой, 69 - с герпесвирусными дерматозами, 25 - с папилломавирусными дерматозами. Отмечена хорошая переносимость всех лекарственных форм гипорамина у детей, не выявлены местнораздражающие, аллергизирующие и общетоксические проявления. Все клиники отмечают высокую, статистически достоверную, эффективность гипорамина, в том числе примененного в виде монотерапии. Так, в Института вирусологии им, Д.И. Ивановского РАМН проведены клинические исследования на 42 больных детского возраста с острыми респираторными вирусными инфекциями (грипп, парагрипп, аденовирусные и РС-вирусные заболевания, а также микст-инфекции), в том числе протекающими с обструктивным синдромом и пневмонией. При этом установлено, что сочетанное лечение гипорамином в виде суппозиториев и сублингвальных таблеток с применением водных растворов лиофилизированного гипорамина в виде ингаляций и капель в нос, способствует достоверному сокращению длительности основных клинических проявлений, таких как кашель, ринит, лихорадка, стеноз гортани, хрипы в легких. Отмечено также более быстрое (в 3 раза) исчезновение вирусного антигена в клетках цилиндрического эпителия слизистой оболочки носа и сокращение сроков выздоровления детей по сравнению с больными, получавшими традиционное лечение (симптоматическая и десенсибилизирующая терапия и, при необходимости, антибиотики). Применение гипорамина у детей с ОРВИ позволило снизить частоту возникновения осложнений и, в связи с этим, необходимость применения антибиотиков. Значительно сократились сроки пребывания детей в стационаре, что особенно важно для детей младшего возраста (5,8+0,36 суток - в испытуемой группе и 10,0+1,22 суток - в контрольной группе). На кафедре детских инфекционных болезней РГМУ получены аналогичные результаты при лечении 78 детей, страдающих ОРВИ с синдромом крупа (стеноз I-II степени, обструктивный бронхит). Применение гипорамина приводило к достоверному сокращению продолжительности основных клинических симптомов (температурная реакция, одышка, явления стеноза, осиплость голоса) и сроков пребывания пациентов детского возраста в стационаре. У больных, получавших гипорамин по схеме, включающей одновременное применение гипорамина в виде ингаляций, таблеток для санации полости рта, капель в нос и суппозиториев, назначение антибиотиков потребовалось лишь в 50% случаев, в то время как в контрольной группе - в 70% случаев. Большой интерес представляют исследования, проведенные кафедрой детских инфекций РМАПО, где гипорамином лечили 37 детей, больных ветряной оспой. Сопоставление данных о клинической эффективности гипорамина в виде суппозиториев, мази, таблеток и средств традиционной терапии (симптоматические, десенсибилизирующие средства и местная обработка раствором бриллиантовой зелени) свидетельствует о том, что при применении гипорамина наблюдается более быстрое прекращение высыпаний и обратное развитие везикулезных элементов (образование корочек и их отпадение), особенно в случаях назначения препарата в ранние сроки болезни (1-3 сутки). Заслуживают внимания данные, полученные на кафедре кожных болезней лечебного факультета РГМУ при лечении 46 детей с герпесвирусными дерматозами, где гипорамин применяли в виде суппозиториев, мази и сублингвальных таблеток. Так. у всех пациентов, получавших гипорамин, отмечено более быстрое, статистически достоверное исчезновение клинических симптомов: регресс высыпаний, отсутствие свежих проявлений, улучшение общего состояния и самочувствия, по сравнению с контрольной группой, получавшей традиционные препараты (таблетки и мазь бонафтона). При этом данные серологического исследования также показали достоверное снижение противовирусных титров антител в исследуемой группе, в то время как в контрольной группе титр антител продолжал оставаться высоким. Средние сроки выздоровления детей при монотерапии гипорамином (7,0+0,5 сут.) достоверно короче, чем в контрольной группе (10,0+0,5 сут.). Не менее интересные данное получены у 44 детей с вирусными заболеваниями кожи и слизистых оболочек в Отделении детской дерматологии ЦНИКВИ МЗ РФ при изучении гипорамина в виде суппозиториев, мази 0,5% и сублингвальных таблеток. Эффективность гипорамина при некоторых вирусных дерматозах, таких как бородавки, остроконечные кондиломы и контагиозный моллюск, не отличалась от методов традиционной терапии (мазь теброфеновая и др.), но применение гипорамина в сочетании с радикальным удалением вирусных папулезных элементов предупреждало в дальнейшем рецидивы заболевания (профилактический эффект). Однако, недостаточное количество больных по каждой нозологической форме папилломавирусных и других вирусных дерматозов и отсутствие статистически достоверных результатов не позволили включить эти данные в число показаний для применения гипорамина. У пациентов, страдающих рецидивирующим герпесом лица, монотерапия гипорамином приводила к достоверному снижению сроков разрешения высыпаний герпеса (8,50+0,92 сут.) в сравнении с контрольной группой, где использовали традиционную терапию - ацикловир (9,75+2,63 сут.). При этом отмечено, уменьшение частоты рецидивов заболевания. Все клиники рекомендовали препарат гипорамин для использования в педиатрии в качестве противовирусного средства как в стационарных, так и в амбулаторных условиях при различных острых и хронических заболеваниях вирусной этиологии, таких как: острые респираторные вирусные инфекции (грипп, парагрипп, аденовирусные и PC-вирусные заболевания, а также микст-инфекции), в том числе протекающие с обструктивным синдромом и пневмонией; заболевания, вызываемые Herpes simplex (острые и рецидивирующие формы простого герпеса); заболевания, вызываемые: Varicella zoster (ветряная оспа). Одновременно клиницисты отметили в качестве благоприятного фактора наличие большого ассортимента лекарственных форм гипорамина и удобство их применения [4, 5].

Гипорамин разрешен для применения у взрослых и детей, в том числе раннего возраста, в качестве лечебно-профилактического средства при гриппе (А и В), парагриппе, респираторно-синцитиальной, аденовирусной и других острых респираторных вирусных инфекциях; ангинах, протекающих на фоне острых респираторных вирусных заболеваний и сопровождающихся ринитами; при острых и рецидивирующих формах простого герпеса экстрагенитальной и генитальной локализации, цитомегаловирусной инфекции, опоясывающем лишае, ветряной оспе и других инфекциях, вызванных чувствительными к препарату вирусами.

Таким образом, исследование гипорамина, нового отечественного противовирусного препарата, в клинических условиях выявило ряд особенностей, отличающих его от других препаратов противовирусного действия. Разнообразие его клинической эффективности можно объяснить, с одной стороны, широким спектром противовирусной активности в отношении ряда РНК- и ДНК-вирусов. С другой стороны, наличием у препарата не только противовирусных, но и антимикробных свойств в отношении ряда патогенных микроорганизмов. Кроме того, для гипорамина установлено наличие интерферониндуцирующего действия. Такое необычное сочетание фармакологических свойств, в том числе влияние на разные виды патогенных возбудителей, и благоприятного воздействия на макроорганизм с отсутствием каких-либо побочных (токсических) эффектов обеспечивает широкий диапазон его терапевтической эффективности в клинике и возможность применения как у взрослых больных, включая беременных женщин, так и в педиатрии, в том числе у пациентов раннего детского возраста. Разнообразие нозологических форм заболеваний, при которых доказана эффективность гипорамина, подчеркивает его особое место среди других противовирусных средств [8].